Il CE biochimico rapido del reagente di digestione 5-15 Min Enzyme BsaI del DNA ha approvato

Enzimi BsaI

gli enzimi sono le serie di enzimi costruiti della restrizione per digestione rapida del DNA in 5-15 enzimi min. possono essere usati per digerire i prodotti genomica e virali del plasmide, del DNA come pure di PCR. Tutti gli enzimi mostrano l'attività superiore nell'amplificatore universale, in modo da hanno semplificato il sistema di reazione enzimatico di digestione. Inoltre, gli enzimi fornisce la ridondanza eccellente degli enzimi, permettendo la digestione facile dei modelli in eccesso o difficili del substrato.

Trasporto e stoccaggio

Le componenti sono spedite con pack e possono essere immagazzinate a -20°C per 2 anni.

Taglio del sito

5' - GGTCTC (N)1↓-3 '

3' - CCAGAG (N)5↑-5 '

Stati raccomandati di reazione

Amplificatore di 1× FuniCut™; Incubi a 37℃.

Inattivazione termica

Incubazione a 80℃ per 20 min.

Controllo di qualità

1. Definizione di attività: 1 DNA del μg pPIC9K completamente si è digerito con 1 μL dell'enzima nel min 15 a 37℃ in un volume totale della reazione di μL 20.

2. Analisi prolungata di attività stella/di incubazione: Nessuna degradazione rilevabile di 1 DNA del μg pPIC9K dovuto contaminazione della nucleasi o attività della stella si è presentata durante l'incubazione con 1 μL di FuniCut™ BsaI per 3 ore a 37℃. L'incubazione più lunga può provocare l'attività della stella.

3. Legatura e Recleavage (L/R) analisi: Dopo digerito con l'enzima 1μL nella circostanza ottimale, ricicli il prodotto da digestione può essere legato sotto la ligasi del DNA T4 a 22℃. Il prodotto di legatura può essere recleavaged dall'enzima.

4. Attività non specifica dell'endonucleasi: Un'incubazione di 1 enzima del μL con 1 DNA del plasmide supercoiled μg per 4 ore a 37℃ ha provocato nessun cambiamento dello stato supercoiled.

Istruzioni

1. Protocollo per digestione veloce di DNA differente

1,1 associazione che le seguenti componenti della reazione su ghiaccio nell'ordine hanno indicato:

[Nota]: prodotti di PCR purificati *For. La quantità di amplificatore di 10× FuniCut™ può essere ridotta a μL 2 dovuto la forza ionica restante nei prodotti non purificati di PCR. Il prodotto di PCR è stato raccomandato per essere digestione priore purificata quando il prodotto di PCR sarà usato per clonare.

1,2 miscela delicatamente (fare non vortice) e rotazione giù.

1,3 incubi a 37℃ per 15 il min (DNA del plasmide) o per 15-30 il min (prodotto di PCR) o per 30-60 il min (DNA genomico).

1,4 facoltativo: Inattivi l'enzima riscaldando per il min 20 a 80℃.

2. Doppia e digestione multipla di DNA

2,1 usi 1 μL di ogni enzima e riporti in scala sugli stati della reazione giustamente.

2,2 il volume combinato degli enzimi nella miscela di reazione non dovrebbe superare 1/10 del volume totale della reazione.

2,3 se gli enzimi richiedono le temperature differenti della reazione, l'inizio con l'enzima che richiede una temperatura più insufficiente, quindi aggiunge il secondo enzima ed incuba all'più alta temperatura.

3. Riportando in scala sulla reazione di digestione del DNA del plasmide

[Nota]: Incubazione in termostato dell'acqua, termostato del metallo o termostato della sabbia. Aumenti il tempo di incubazione se il volume totale della reazione supera il μL 20.

Numero dei siti di riconoscimento in DNA